微生物检验技术论文(2)

时间：2017-03-11 15:25:50 家文952由分享

微生物检验技术论文

　　微生物检验技术论文篇二

　　浅谈空气微生物的检验技术

　　摘要：目的：探讨空气微生物的检验措施。方法：通过实验室的科学检验，掌握空气微生物的属性与致病因素，总结出系统的检验措施和相应的控制方法。结论：科学准确的掌握空气微生物的检验措施，把握致病规律，才能为有效的控制和预防相关疾病提供可靠的依据。

　　关键词：空气微生物;检验;细菌

　　【中图分类号】R446.5 【文献标识码】B 【文章编号】1672-8602(2014)01-0188-01

　　存在于空气中的微生物。是主要的空中浮游生物。对较干燥环境和对紫外线具有抗性的种类，主要有附着于尘埃上的从地面飞起的球菌属(包括八叠球菌属在内的好氧菌);形成孢子的好氧性杆菌(如枯草芽孢杆菌);色串孢属等野生酵母;青霉等霉菌的孢子等。下面将空气微生物的检验技术分析汇报如下。

　　1各类微生物的基本检验程序

　　空气中微生物检验主要分为细菌、病毒、真菌、立克次体类的检验。

　　2几种常见空气微生物采样

　　方法及细菌菌落总数测定

　　2.1Andersen采样器

　　2.1.1构造：新型采样器是Andersenl958年研制而成由采样胶体、流量剂、压力计和抽气泵组成。

　　2.1.2特点： ①采集空气微粒范围宽;

　　②采样效率高;

　　③生物失活率低;

　　④敏感性高;

　　⑤操作简便;

　　⑥应用范围广，常用于空气致病微生物的采集。

　　2.1.3操作步骤：①消毒

　　采样器的消毒方法有3种：75%酒精;高压蒸气灭菌：用于采样头的消毒;环氧乙烷消毒。

　　②有关参数设定：

　　流量，28.3L/min，固定流量抽吸空气，流量准确与否是该采样器操作的关键所在，流量不准或未经校正的采样器不可使用。真空度，0.1354kPa。若真空度不够，可影响气流速度，从而影响采样效率。

　　③平皿制备

　　采样用培养基平皿要提前一天准备好，每个样品需6个平皿，预置37℃18～24h培养，无细菌生长，即可用于采样。

　　④采样高度

　　根据采样目的而定，一般置于人的呼吸带高度，大约1.0～1.5m左右，并且采样人员应远离采样头。采集时间要根据现场微生物污染程度而定。

　　⑤培养

　　打开采样器，盖上平皿盖。细菌培养37℃培养48h，真菌培养28℃培养72h。

　　⑥菌落计数：计数方法可以采用分段计数及菌落计数器进行。一般以菌落形成单位表示。一般每个平皿最多不超过250cfu。

　　2.2THK-201型采样器

　　2.2.1构造： THK-201型采样器是在JWL型采样器基础上改进而成。基本构成包括：采样头、流量计、抽气泵、可调电路。

　　2.2.2特性： ①采样头的筛孔(隙)为可调式;

　　②捕获率高;

　　③适应范围广，在不同环境通过调节筛孔来采集不同大小的微粒提高了其应用范围，可采集细菌、真菌、病毒、立克次体、原生动物、植物、花粉、藻类等，适用于环保、生物工程、医疗卫生、卫生防疫、工农牧业、食品加工业等;

　　④功能齐全。

　　2.2.3操作步骤： ①平板制备

　　制作平皿培养基应注意厚薄均匀，保证无菌。琼脂浓度要较其他采样方法略高一点(≤2.4%)，过高过低均会影响采样效率。

　　②仪器相关参数

　　电源，工作电压：220V;转速，选档，定时范围;流量，5～35L/min;采样筛头，最小狭缝≤20μm，最大500μm。根据需要分级调节，使用时要对环境中微生物有一个大略估计，以便进行筛孔调节。

　　③培养

　　方法和时间同Andersen采样器。

　　2.3自然沉降采样法

　　2.3.1特点：①简便易操作，不需特殊采样器，只需采样的平皿培养基。

　　②能反映沉降细菌的数量，特别是医院的烧伤外科、手术室、人流室等一些相对空气流动性不大，但空气中微生物在静止时下落到物表，造成污染，更严重的造成院内感染。

　　③可用于粗略反映空气中细菌污染状况。

　　④此法不足之处：用下落菌推算空气中悬浮菌量，有推理上的错误。比较公认的是奥梅梁斯基的公式来推算浓度，他认为在100cm2培养基表面，5min内能落下约10L空气中所含菌量。标准细菌种类较少。采样条件要保证无菌状态，十分难以控制[1]。

　　2.3.2自然沉降法采样的操作步骤：①培养基的制备：

　　一般采用9cm直径平皿制作。细菌用普通营养琼脂，真菌用沙堡培养基或察氏培养基。制备好的平板应置35～37℃预培养18～24h，选无菌生长的平皿用于采样。

　　②选择检测点：

　　室内面积≤30m2沿一对角线上取三点，即中间一点两端各距墙1m处各取一点，室内面积>30m2，设东、南、西、北、中5个点，各点均距墙1m，采样高度0.8～1.5m。若使用采样器监测时，采样器应距地面高度33cm，离门窗及人员流动1m以上，且采样器与采样者要保持一定距离(50cm)，防止采样者自身细菌被吸入采样器而影响检测结果。室外采样要根据该地区气象、交通、大气污染程度、建筑物布局、有无树林等进行合理选点，选点数不定，每个点采样高度1.5m以上。可以一个点同时放置两个平皿，以平均菌落数代表该点的菌落数。

　　③暴露平血时间：

　　原则是保证客观反映采样点情况，采样后平皿中生长的菌落数要便于准确计数，太多以至于无法计数将造成较大偏差，一般洁净室内暴皿时间可在5～30min，一般室内较洁净的地方，多采用暴皿5min即可。

　　④培养：

　　细菌样品35～37℃培养48h，真菌样品置28℃培养72h。

　　2.4JWL型采样器

　　2.4.1结构：由采样头、流量计、抽气泵、电源电路4部分构成。

　　2.4.2特点： ①采样的平皿可以转动，使平皿上菌落均匀分布;

　　②交一直流两用，应用简便;

　　③自动按时采样，可采细菌和病毒;

　　④但对空气中占大多数的粒子捕获率低。

　　2.4.3操作步骤： ①平皿制备

　　细菌用普通琼脂，真菌用选择性培养基(如察氏培养基)。平皿要求厚薄均匀，表面水平，加培养基量4.5ml，琼脂浓度1.8%～2.4%为宜。