基因检测技术论文(2)
基因检测技术论文篇二
转基因农产品检测技术浅析
【摘 要】有效科学的农产品检测基因手段可合理解决社会大众对转基因产品质量、安全问题的疑问。本文着重研究了转基因农产品外源蛋白以及核酸分析检测方式。通过多渠道验证，探究了基础原理，具体的技术特征以及实践应用。对推进检测转基因农产品技术的科学持续发展，优化农产品整体质量水平，有重要的实践意义。
【关键词】农产品;转基因;检测技术
0.前言
伴随农产品生产水平的全面提升，对于转基因产品的质量安全问题逐步引起了各个国家、不同组织以及学界的广泛争议。转基因技术通过现代分子生物手段，令某类物种包含的基因转移至他类农作物，进而令其遗传物质形成改变，并呈现出形状、质量、营养层面的进一步完善，向着消费者需求目标进行发展转变，进而获取到改良基因农产品。目前一些转基因生产的农产品逐步流通进入了市场之中，创设了显著的经济效益与利润。然而其有可能形成对大众身心健康以及生态环境的危害风险、各类不确定因素逐步引起学界人士的重视，他们纷纷表示担忧。该类现状问题进一步推进了转基因农产品应用检测手段的快速发展。各类高通量、精准、高效的转基因产品应用检测手段得以研究开发，欧盟体系、美国以及我国等地逐步出台了转基因产品的管理政策与制度法规，进一步推动转基因物种、产品标签体制的落实执行，进而保证转基因农产品整体质量与生产安全，降低隐藏危机影响。当前生物技术行业领域正逐步研究应用转基因农产品检测技术分析验证外源蛋白质以及核酸，并派生出较多技术手段的分支，该类技术手段呈现出各自不同的优势与缺陷。
1.外源蛋白质应用检测方式
基于抗体以及抗原免疫学原理，可利用对外源基因蛋白进行检测，来达到定性定量的目标。创建检测体系需要令外源体系基因形成的蛋白产物通过制备构成特异单克隆以及多克隆抗体，进而形成蛋白质印迹、试纸条测试以及酶联免疫测试手段。
1.1蛋白质印迹检测
该方式依据抗原抗体呈现的特异性，对复杂物质中的某类蛋白进行检测。可通过非标记抗体以及抗原决定簇进行集成，而后通过另一类蛋白或是免疫球蛋白对集成抗体进行分析测试。该方式具有明显的特异性，可良好的进行定性检测，为分析各类复杂混合物质之中具备特异蛋白的有效手段，检测灵敏性可达到一到五纳克。特别契合较难溶解或是不溶解蛋白质的测试分析。然而该方式无法实施定量研究，这是由于具体的操作环节较为复杂繁琐，同时需要投入较多经费，不契合高通量验证测试。
1.2 ELISA检测
ELISA检测方法即酶联免疫吸附测试技术，主要令抗原以及抗体特异性同酶对底物通过有效脆化进行集成，依据酶反映令底物进行显色。在抗体以及抗原进行集成阶段中，通过比色以及荧光反应明确转基因的具体成分。该阶段中酶以及底物反应具体的色彩同样品抗原含有的总量呈现正比例关系。
该方式体现了酶反应较明显的灵敏性，以及抗体抗原具备的特异性。一般来讲检测灵敏性可为百分之零点一，同时操作便利高效，投入经费合理。当然该技术手段仍旧包含一定问题，即农产品具备的复杂基质会形成测定过程的干扰影响。同时一些导入蛋白并非位于植物各个组织之内均能表达展现。例如在玉米农作物之中蛋白质通常在叶子中，而非展现在谷粒内。加工生产阶段中作物含有的蛋白质会形成降解，因而该类技术手段只契合没加工的各类原材料分析验证。倘若导入DNA蛋白质不表达，则无法应用该类检测技术。
1.3免疫试纸条法
应用试纸条测试蛋白同样基于抗体抗原特异性，其将消化纤维取代聚苯乙烯作为固相载体。通过连接显色剂令外源蛋白抗体固定于试纸条中。并令其一段至入包含外源蛋白物质提取液内。试纸另一头毛细管通过吸水令提取液进行上流。一旦特异抗体以及外源蛋白实现融合，便会形成显色反映。该检测方式应用便利，可快速进行操作。通常在五到十分钟可得到检测结论。然而一类免疫试纸条仅能测试一类蛋白质，无法对农作物转基因具体品系进行清晰划分，同时呈现出的检测灵敏性不高。
2.核酸应用检测方式
检测核酸应用方式主体分成四类，一类为核酸印迹方式，另一类为PCR技术。后者还可分成定性手段、复合手段以及竞争定量手段、荧光手段、基因芯片等方式。
2.1核酸印迹方式
核酸印迹方式不但可分析验证外源DNA，还可明确外源基因排列状况、具体的拷贝数以及植株后代呈现出的外源基因可靠性。该方式可消除操作阶段中存在的污染影响与转化阶段质粒残留导致的假阳性反映。然而该方式可令目标DNA实现原位杂交，并不履行放大以及扩充过程，因而检测精密性较PCR方式低出较多，同时具体流程较为复杂。
2.2 PCR检测方式
PCR检测方式基于不全面一致原理以及结果模式，体现出显著的灵敏性，同时转基因范畴中应用频繁广泛。相比于蛋白质特异性，该技术手段不会受应用材料影响。同时核酸属性较蛋白质更加可靠，变性后较易体现复性。定性检测方式具体原理同DNA天然复制较为相似，需要经过变性、退火以及延伸的具体流程。令提取得到的样品DNA用于模板，并将寡核苷酸链用于引物，令其同外源基因序列实现补充配对，基于聚合酶的功能，可位于体外高效的特意扩增基因目标片段，进而令具体微量目标片段可快速的扩充并上升到百万倍水平。
最终形成的产物在染色后将可清晰的分辨出来，而无需利用杂交分析便可辨别认清基因组内具体的核苷酸序列。该技术方式为一类高效灵敏的检测验证核酸手段，通常灵敏性可达到百分之零点零一。当前在转基因农产品中实现了广泛的检测应用。通常，先验证样品来源，利用常用植物标准基因验证实现。而后，验证转基因农产品中通常包含的三类通用元件，及启动和终止子，还有标记基因。倘若得到阳性结果，则需要继续验证外源结构基因。当前我国逐步研究开发了PCR定性验证方式，并颁布了行业领域相关技术标准。
3.结语
总之，伴随农业生产之中基因手段技术的丰富应用，更多样化的改良性质转基因作物实现了世界范畴中的多元化种植。我国逐步批准对棉花、甜椒、水稻等农作物进行转基因生产。其商业化逐步引发了安全问题。为此，我们只有创建高效可靠的转基因检测技术方式，方能做好安全可靠的验证分析，明确转基因作物具体质量，进一步推进检测技术实现丰富、优化、全面、可靠的发展与升华。
【参考文献】
[1]黄玉萍，吴贵茹，陈坤杰.近红外光谱在转基因农产品检测中的研究进展[J].江西农业学报，2010，22(7).
[2]赵成萍，袁建琴，唐中伟，许冬梅，刘建东，史宗勇.转基因棉籽DNA提取纯化及快速PCR检测研究[J].现代农业科技，2011(3).
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