什么是单克隆抗体介绍(2)
四、产品特点：
高灵敏度、高特异性、结果容易判定。当然您如果觉得很多试剂自己可以准备想省一笔费用，那您可以登陆网站选择我们为您准备的简装抗体鉴定产品C030215。当然您也可以下次把标本交给我们来做并且不会增加太多费用!!
五、保存条件：
2-8℃避光保存效期一年。不正确存放或过于频繁开启使用有可能因此使效期缩短。
六、注意事项：
1、虽然本试剂盒过期后很久还有使用价值但还是请您在有效期内使用。
2、在检测腹水类单抗时要稀释到1/5万，虽然可以分辨但并不建议您这样做。此类样品成分十分复杂，有干扰结果的可能。在此种情况下您可以选择本公司的C030215抗体鉴定试剂。它会给您带来满意的结果。
3、手洗板子时一定要把孔加满，停留10秒然后弃尽，最后要拍干净。特别是在酶标二抗温育后洗板时一定要把酶吸出而不是甩出，要吸净。这个在手工洗板时对结果很重要。
4、一次没用完的板子要带干燥剂放自封袋封好，随盒存放。
5、拿放板子时不要剧烈抖动，以免孔间交叉污染出现错误结果。
6、出现异常结果请随时咨询我们。
单克隆抗体的克隆化方法
经过抗体测定的阳性孔，可以扩大培养，进行克隆，以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。克隆的时间一般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生指定抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早，太早细胞性状不稳定，数量少也易丢失。克隆化的阳性杂交瘤细胞，经过一段时期培养之后，也还会因为细胞突变或特定染色体的丢失，使部分细胞丧失产生抗体的能力，所以需要再次或多次克隆化培养。克隆化次数的多少由分泌能力强弱和抗原的免疫性强弱而决定。一般说，免疫性强的抗原克隆次数可少一些，但至少要3～5次克隆才能稳定。克隆化的方法很多，包括有限稀释法、显微操作法、软琼脂平板法及荧光激活分离法等。
(一)有限稀释法
1.材料
(1)微量培养盘，盘内各孔于克隆化前一天培养小鼠腹腔细胞(即饲养细胞)每孔2万～4万。
(2)HT培养基
2.操作方法
(1)取出抗体阳性孔细胞，用HT培养液制成细胞悬液。并取样进行台盼兰染色，计数。
(2)用HT培养液将细胞稀释成200个/ml、40个/ml、20个/ml和的悬液。
(3)用吸管将细胞悬液分别种入微量培养盘，每孔0.05ml，细胞含量分别为10个/孔、2个/孔、1个/孔和0.5个/孔。
(4)5%CO2饱和湿度，37℃培养。
(5)每天用倒置显微镜观察克隆生长情况，选择只有一个集落生长的孔，弃掉两个以上和没有细胞生长的孔。
(6)克隆大量繁殖后，布满孔底的1/3～1/2时，测培养液抗体。
(7)抗体阳性孔细胞，移到有饲养层的组织培养瓶中，并传2～4代就可以脱离饲养细胞，建成克隆株。
(二)软琼脂克隆化
借助撒在软琼脂上单个细胞定位生长，而达到克隆化，具体操作如下：
1.配2.5%的琼脂糖30ml，水浴溶化后，移入45℃水浴中。
2.将117ml完全DMEM液和3ml10倍浓度的DMEM液混合，置45℃水浴预热。
3.将琼脂糖与DMEM液混合，即为含0.5%琼脂糖的完全DMEM液，并加75×108脾细胞。
4.每块平皿加10ml，于室温中凝固。
5.DMEM中的细胞与DMEM—琼脂1:1混合，将细胞琼脂混合物2ml铺于凝固的平板上，使其全部覆盖。
6.放入CO2箱饱和湿度，37℃培养10天。
7.用PBS配制0.6%琼脂糖，于沸水浴溶解后，置45℃，在保温情况下取一试管，迅速加入0.1ml25%羊红血球，0.2ml豚鼠补体，2.7ml0.6%琼脂糖。
8.用3ml琼脂糖—羊红血球混合液覆盖克隆。于37℃CO2箱孵育1h~2h。从克隆上部溶解羊红血球的溶血范围，可筛选抗羊红血球Ig。
(三)显微镜操作法
在直径6cm培养皿中，加入1ml1.0×108细胞悬液放置5%CO2饱和湿度，37℃温箱中放置30min以上，倒置显微镜下，寻找那些与周围相距甚远的单个细胞，将毛细管口(一头有直角弯头毛细管，一头连接一尺长乳胶管，用口控制液体进入)水平置放于液面上，左右微动，直到看见管口，对准细胞，吸入毛细管，将管中细胞移到预先加有2.0×104~5.0×104饲养细胞96孔板内，培养后，即可获得单个细胞形成的克隆。
(四)荧光激活分离法
用一种荧光激活细胞分类器(FluoresceinActivafedCellSorter，FACS)。其基本原理是：将细胞经荧光抗体染色后，经喷嘴形成单个细胞的线形液滴，在莱塞光激发下，荧光素发射荧光，此信号由光电倍增管接收，再结合细胞形态大小产生光散射信号，经电脑处理，产生信号并与预定的信号对比，根据细胞荧光强度及细胞大小不同，将细胞分成不同级别，在电场中发生偏离，而分别收集于不同容器中。
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